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多肽廠家如何溶解疏水性多肽?

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多肽廠家如何溶解疏水性多肽?

發(fā)布日期:2017-06-30 作者:江蘇吉泰肽業(yè)科技有限公司 點(diǎn)擊:

在一些情況下,某些肽具有很高的疏水性時,不易溶解,可以用少量的DMF或DMSO幫助其溶解,這時推薦將多肽溶解于高濃度,然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度。因?yàn)辂}會導(dǎo)致疏水性多肽的聚合,所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液進(jìn)一步稀釋。當(dāng)您遇到這種情況時,請您注意以下幾點(diǎn)說明:

  a. DMF或DMSO的使用有助于多肽的溶解,這是通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶。

  b. 這種試劑的使用可能會對其生物活性及后續(xù)的研究工作造成干擾,請您在溶解考慮到這個問題。

  如果多肽溶解不好該怎么辦?

  對于使用多肽的研究人員來說,多肽的溶解經(jīng)常是一個主要的難題。每個氨基酸都有不同的物理特性,所以不同的多肽有著不同的溶解性。通常方法,多肽首次須溶解于蒸餾水,更適合消毒水。如果溶解還是有問題,請嘗試如下步驟:聲波降解有助于溶解多肽。少量醋酸稀釋溶液(10%濃度)有助于一般多肽的溶解,氨水溶液有助于酸性多肽的溶解。我們還推薦將多肽溶解于高濃度,然后用水或緩沖液將其稀釋到正常的工作濃度,因?yàn)辂}會導(dǎo)致聚合。(所以必須在多肽完全溶解后加入緩沖液。)

   

 是否需要在特殊PH值中溶解多肽?

    報告將會指示是否有特殊PH值的要求。 如果有特殊PH值要求,C.O.A報告中會注明。

有些溶解性上寫“ACN”,是什么意思?

    “ACN”是乙腈,是用來幫助溶解某些肽的。

凍干多肽的溶解

  1. 多肽溶解中的主要問題是二級結(jié)構(gòu)的形成。

  雖然疏水肽鏈二級結(jié)構(gòu)的形成更明顯,但除了最短的肽鏈外,該現(xiàn)象發(fā)生在幾乎所有肽鏈,與極性無關(guān)。因此,溶解多肽的第一個原則是用無菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無氧水)。

  多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解。為避免該現(xiàn)象的發(fā)生, 多肽應(yīng)溶解在無菌的蒸餾水中, 或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過濾除菌。

  包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化, 因此應(yīng)該溶于無氧的水中。無氧水可以通過注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。

  2. 若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意: 超聲處理會引起溶液發(fā)熱和多肽降解。

  3. 若多肽中包含多個堿性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液;對于疏水性非常強(qiáng)的多肽,則使用50%乙酸。

  4. 若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整。

  5. 異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機(jī)溶劑的量則必須很少,否則將嚴(yán)重影響停留時間。

  6. 若多肽因?yàn)楹蠽al、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側(cè)鏈而高度疏水,或?yàn)橹行噪臅r, DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。

  a. 高濃度膜變性劑通過破壞多肽的二級結(jié)構(gòu)而助溶。

  b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備, 但可能會對其生物活性的研究工作造成干擾。

  c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達(dá)30%), 滴加至多肽溶解。

  d. 反相層析時, DMF將與洗脫液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF 流出后幾分鐘內(nèi)流出, 若肽鏈很小, 洗脫太早, 多肽的量將降低。

 對于一些難溶解于雙蒸水或緩沖液的肽常用稀乙酸(30%-50%)或稀氨水(30%左右)分別對于堿性(含Arg , Lys , His)或酸性(含Asp, Glu)多肽的溶解。這些方法不溶的多肽, 需要用少量DMF、DMSO溶解,然后加入適量緩沖液,這些溶劑可能對某些實(shí)驗(yàn)有副作用,所以在實(shí)驗(yàn)時要加注意。

注:肽鏈中含有殘基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe,Gln,Asn和Val將會增加多肽的溶解難度。


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