江蘇吉泰肽業(yè)科技有限公司
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按條件溶解多肽
若多肽不溶于純水,超聲處理有助于打碎顆粒并增加溶解度。注意:超聲處理會(huì)引起溶液發(fā)熱和多肽降解。
若多肽中包含多個(gè)堿性氨基酸,使用1~10%的乙酸水溶液;對(duì)于疏水性非常強(qiáng)的多肽,則使用50%乙酸。
若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用1~10%氨溶液或乙酸乙基嗎啡或重碳酸鹽等揮發(fā)性的堿性緩沖液溶解。pH值在層析前必須調(diào)整。
異丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有機(jī)溶劑的量則必須很少,否則將嚴(yán)重影響滯留時(shí)間。
若多肽因?yàn)楹蠽al、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳烴側(cè)鏈而高度疏水,或?yàn)橹行噪臅r(shí),DMF或DMSO等膜變性劑的使用,有助于多肽的溶解。
a. 高濃度膜變性劑通過(guò)破壞多肽的二級(jí)結(jié)構(gòu)而助溶。
b. 膜變性劑適于多肽分析液的制備,但可能會(huì)對(duì)其生物活性的研究工作造成干擾。
c. DMF是最佳變性劑(最高濃度可達(dá)30%),滴加至多肽溶解。
d. 反相層析時(shí),DMF將與洗脫液前峰一起流出,依進(jìn)樣量的多少,峰值可能很高。大多數(shù)肽能在大量DMF流出后幾分鐘內(nèi)流出,若肽鏈很小,洗脫太早,多肽的量將降低。
凍干多肽的保存
所有標(biāo)明“保持凍干”的產(chǎn)物,都必須保存在冰凍條件下,最好-20℃,若保存在-10℃以下,大多數(shù)肽可維持幾年的活性。
當(dāng)使用冰凍產(chǎn)品時(shí),開(kāi)蓋之前,瓶或試管應(yīng)在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內(nèi)升至室溫。對(duì)于保存于-20℃的產(chǎn)品,這個(gè)過(guò)程需要一小時(shí)或更長(zhǎng),隨包裝大小而異。否則,當(dāng)瓶打開(kāi)時(shí),水氣進(jìn)入導(dǎo)致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開(kāi),應(yīng)迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,尤其親水肽更應(yīng)注意。
多肽溶液的保存
多肽溶液比干粉的穩(wěn)定性差很多,為了得到最好結(jié)果,遵循下列原則:
反復(fù)凍融有損于肽的活性,所以建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少,用后棄掉剩余物。
溶于pH5~7無(wú)菌的緩沖液中,貯存于-20℃。
包含Cys、Met、Try、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此須保存在無(wú)氧化劑的環(huán)境中。
由于細(xì)菌能降解多肽,因此貯存前必須過(guò)濾除菌。
凍干多肽的溶解
多肽溶解中的主要問(wèn)題是二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成。
雖然疏水肽鏈二級(jí)結(jié)構(gòu)的形成更明顯,但除了最短的肽鏈外,該現(xiàn)象發(fā)生在幾乎所有肽鏈,與極性無(wú)關(guān)。因此,溶解多肽的第一個(gè)原則是用無(wú)菌的蒸餾水或去離子水(如果條件允許則用無(wú)氧水)。
多肽溶液可能遇到細(xì)菌降解。為避免該現(xiàn)象的發(fā)生,多肽應(yīng)溶解在無(wú)菌的蒸餾水中,或者用0.45或0.2μm孔徑的濾膜過(guò)濾除菌。
包含Cys、Met、Trp的多肽特別容易氧化,因此應(yīng)該溶于無(wú)氧的水中。無(wú)氧水可以通過(guò)注入惰性氣體(氮、氦、氬)減壓除氣得到。