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多肽在-20°C很穩(wěn)定,特別是冷凍干燥并保存在干燥器中,在將它們暴露于空=氣之前,冷凍干燥多肽可以放于室溫。這將是濕度影響減少,當(dāng)無法冷凍干燥時(shí),方法是以小的工作樣量存放。
對于多肽,脫氧緩沖劑對其溶解必不可少,因?yàn)檫@種多肽合成可易空氣氧化,在封瓶前,慢慢流過多肽的氮?dú)饣驓鍤庖矔档脱趸饔?。含GIn或多肽也杏易降解,所有這些隊(duì)與不含這些自問題解有的那些隊(duì)淚比,生命期有限。多隊(duì)的溶解性
大多數(shù)肽的首先溶劑是超純抽氣水。稀乙酸或氨水分別對于堿性或酸性多肽的溶解很重要。這些方法不溶的多肽,需要DMF、脲來溶解,這些溶劑可能其些實(shí)驗(yàn)有副作用。所以我們建議設(shè)計(jì)多肽時(shí)要加注意.殘基將全增加多肽的溶解難度。
您需要特殊的多肽或任何技術(shù)幫助,請隨時(shí)與我們聯(lián)系。我們包你完全滿意,對于我們不能適當(dāng)合成的順序,我們不收費(fèi)。多肽的保存和操作
包裝1mg或更少的多肽按凈重包裝,聲明的小瓶重不含相關(guān)抗離子和水。例如,氨基酸分析決定的肽含量是80%,在1mg樣品中,那么瓶中毛重是1.25mg。大量的多肽以毛重算。標(biāo)出的重量含相關(guān)抗離子和水,樣品中肽百分比為90%。
不要把肽含量和純度摘混了。肽的純度可能是100%,而肽含量相關(guān)帶電基團(tuán)的抗離子量和肽親水性決定。這是合成肽的本身特性。凍干肽的保存所有產(chǎn)品應(yīng)存于冰箱。多數(shù)肽以此方法可以存放幾年不變。肽溶液的保存
溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定。溶液應(yīng)為中性保存的。為避免樣品的反復(fù)凍融,最好分成小樣存放。一份樣品融東后未用完。細(xì)菌降解有時(shí)會成為溶液肽的麻煩,為克服此,肽應(yīng)溶于無菌水,或肽溶液用0.2μM濾膜過濾。多肽的重建和操作
多數(shù)肽溶于無菌蒸溜水。初次溶解時(shí),要注意使初始濃度比要求濃度大,如果多肽僅有限溶解性,這便允許加入其它溶解劑或緩沖鹽。如果多肽在水中的溶解性有限,有幾種選擇可幫助溶解:對堿性肽用稀乙酸酸性肽用稀氨水對極疏水的肽用10%有機(jī)修飾物極不溶的肽用DM50或DMF
瞬的濃溶液也很有用,與上述方法合用,聲處理也是溶解多肽的有效手段。多肽應(yīng)用和保存
多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結(jié)構(gòu)。除了最太肽外,這點(diǎn)都會發(fā)生,在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進(jìn)二級結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率,可用聲處理。溶解仍有問題,加少量稀乙酸(10%)或氨水,會便于溶解。
要長期保存多肽,冷凍干燥,冷干粉可在-20C或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。多肽易受細(xì)菌降解,應(yīng)用無菌純化水溶解。
含有殘基的多肽溶液由于氧化,壽命有限。應(yīng)溶于無氧溶劑,為防止重復(fù)凍融的破壞,建議溶解過量的肽的便實(shí)驗(yàn),其余多肽以固體形成保存。HPLC分析和純化
分析HPLC使用柱子和泵系統(tǒng),可以經(jīng)受傳遞高壓,這樣可以用極細(xì)的微粒(3-10μ m)做填料。由此多肽要在幾分鐘內(nèi)高度被分析。
HPLC分兩類:離子父換和反怕。離子必?fù)QHPLC依靠多 臥和回相間的直接電荷相互作用。杜子在一定PH范圍帶 自特定電荷衍變成一種離子體,而多肽或多隊(duì)混臺物,出其氨基酸組成表現(xiàn)出相反電荷。分離是一種電荷相互作用,通過可變PH, 離子強(qiáng)度,或兩者洗脫出多肽,通常,先用低離子強(qiáng)度的溶液,以后逐漸加強(qiáng)或一步-步加強(qiáng),直到多肽火柱中洗脫出,離子交換分離的-一個(gè)例子使用強(qiáng)陽離子交換柱。如通過酸性PH中帶正電來分離.
反相HPLC條件與正常層析正相反。多肽通過疏水作用連到柱上,用降低離子強(qiáng)度洗脫,如增加洗脫劑的疏水性。通常柱子由共價(jià)吸附到硅上的碳?xì)渫殒湗?gòu)成,這種鏈長度為G4-G8碳原子。由于洗脫是一 種疏水作用。長鏈柱比短鏈對小的,高帶電肽好。另一方面大的疏水肽用短鏈柱洗脫好。然而,總體實(shí)踐中,這兩類柱互變無多少顯著差別,別類載體由碳水化合物構(gòu)成,比如苯基。
典型的操作常由兩綬沖劑組成,用線型梯變以每分鐘0.5%到1.0%改變的速度混合。
大量各種緩沖劑含許多不同試劑,這樣許多不同組合可形成緩沖劑,但要注意一點(diǎn):硅反相柱料不能長時(shí)間暴露于高pH,甚至微堿pH,因?yàn)檫@樣會破壞柱子。
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