有沒(méi)有人員對(duì)檢測(cè)限、定量限、報(bào)告限、忽略限及他們之間迷霧一般的關(guān)系有諸多困惑？在工作中、培訓(xùn)中也有很多人問(wèn)過(guò)老王，一些問(wèn)題可能重復(fù)解答過(guò)多次。閑暇之時(shí)，老王把自己對(duì)于他們及他們之間的錯(cuò)綜關(guān)系和應(yīng)用要點(diǎn)進(jìn)行梳理總結(jié)，今天與大家聊聊，或可供參考。

一、定義與釋義：

檢測(cè)限D(zhuǎn)etection Limit（限度試驗(yàn)）：試樣中被測(cè)物質(zhì)被檢測(cè)出的最低量。從定義來(lái)看這一指標(biāo)只能用于限度檢查，而不能進(jìn)行報(bào)告定量結(jié)果。

定量限Quantitation Limit（定量試驗(yàn)）：試樣中被測(cè)物質(zhì)被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)符合準(zhǔn)確度和精密度要求。（也是成線性范圍的最低濃度或量），可衡量方法靈敏度與定量檢測(cè)能力。

報(bào)告限（Reporting Threshold）：高于此限度的降解產(chǎn)物需報(bào)告其含量。法規(guī)要求大于該限度必須報(bào)告的，是基于質(zhì)量可控性的科學(xué)性和嚴(yán)格性的平衡。

忽略限D(zhuǎn)isregard Limit：字面理解，低于此限度的雜質(zhì)可直接忽略不計(jì)，執(zhí)行層面可理解為低于此限度的單個(gè)雜質(zhì)可不報(bào)告，可不計(jì)入雜質(zhì)總和。

二、如何獲得檢測(cè)限、定量限、報(bào)告限？

定量限與檢測(cè)限是對(duì)于分析方法的檢出能力和靈敏度的測(cè)試，需經(jīng)方法驗(yàn)證而得。

1、檢測(cè)限：通常的做法是配制一個(gè)溶液，通過(guò)稀釋獲得信噪比≥3:1的溶液作為定量限（日常為了方便稀釋與計(jì)算、以及看檢測(cè)限與定量限的對(duì)應(yīng)關(guān)系，通?？上茸龆肯?，然后用定量限溶液再稀釋為檢測(cè)限）。

常見(jiàn)問(wèn)題：方法驗(yàn)證中，檢測(cè)限的信噪比大于10:1，是否還能將這個(gè)水平當(dāng)做檢測(cè)限？

當(dāng)然不能，既然信噪比已經(jīng)大于10:1，也就說(shuō)明可以準(zhǔn)確定量了，為什么還要當(dāng)做檢測(cè)限，可能會(huì)導(dǎo)致一些雜質(zhì)不被報(bào)告。

2、定量限：通常的做法是配制一個(gè)溶液，通過(guò)稀釋獲得信噪比≥10:1的溶液作為定量限。也可直接用一定濃度的溶液直接進(jìn)樣，信噪比＞10:1即可。例如，報(bào)告閾值為0.05%，則可直接使用≤0.05%對(duì)應(yīng)的溶液進(jìn)樣，查看信噪比符合即可。

3、做檢測(cè)限和定量限要點(diǎn)和注意事項(xiàng)

（1）選擇待測(cè)物質(zhì)附近（前、后）基線平滑的基線，時(shí)間持續(xù)1min左右即可，但是需要注意6針中的同一成分的選擇時(shí)間應(yīng)保持一致（日常工作中可能部分不理解定量限考察意義的人員會(huì)選擇遠(yuǎn)離待測(cè)成分的基線，選擇時(shí)段可能也不一樣的情況）

（2）一定要是連續(xù)進(jìn)樣，通常建議LOQ進(jìn)樣6針（因其要符合準(zhǔn)確度和精密度要求），LOD進(jìn)樣3針。

（3）LOQ信噪比6針均要≥10：1；LOD信噪比均要≥3:1

（4）ICH（Q3A、Q3B）中分析方法描述：定量限應(yīng)不大于（≤）報(bào)告限”，故有關(guān)物質(zhì)方法驗(yàn)證/確認(rèn)中進(jìn)行定量限試驗(yàn)時(shí)，需要提前計(jì)算一下該藥品的日服用劑量，然后從ICH指導(dǎo)原則中看一下報(bào)告限是多少，驗(yàn)證/確認(rèn)結(jié)果一定要與法規(guī)上的報(bào)告限進(jìn)行對(duì)比，定量限不能大于報(bào)告限。

（5）如與CRO公司合作等，在接收、審核資料時(shí)也要注意。（常見(jiàn)問(wèn)題，人員方法驗(yàn)證作出的定量限大于ICH中的報(bào)告限）

（6）因檢測(cè)限、定量限除了方法的靈敏與否之外，受儀器性能影響較大。做檢測(cè)限與定量限時(shí)，注意要考慮到不同性能、不同品牌儀器的差異，一定不能刻意去挑選性能和靈敏度非常好的儀器進(jìn)行試驗(yàn)。

（7）為便于數(shù)據(jù)應(yīng)用及撰寫(xiě)資料方便，每針單獨(dú)計(jì)算信噪比（報(bào)告中需要報(bào)出）；計(jì)算出定量限/檢測(cè)限濃度，如0.0502ug/ml，同時(shí)計(jì)算出定量限/檢測(cè)限（相當(dāng)于供試品濃度的百分比）=定量限/檢測(cè)濃度/供試品濃度。

4、報(bào)告限：根據(jù)藥品的日服用劑量，詳見(jiàn)ICH指導(dǎo)原則（附圖1）,其余見(jiàn)“五、報(bào)告閾值

三、檢測(cè)限、定量限、報(bào)告限之間的關(guān)系是什么？

ICH中規(guī)定定量限≤報(bào)告限，檢測(cè)限又小于定量限，從而推得3者的關(guān)系：檢測(cè)限＜定量限≤報(bào)告限。

聊到這里，可能有人著急了，那他們和忽略限的關(guān)系呢？不要著急，欲知關(guān)系如何，且聽(tīng)下節(jié)分析。

四、聊聊“忽略限“？

說(shuō)實(shí)話，這一節(jié)的標(biāo)題老王想了又想，覺(jué)得還是沒(méi)有合適的標(biāo)題，只能對(duì)”忽略限“先畫(huà)個(gè)問(wèn)號(hào)，再逐步聊聊為什么。因?yàn)楹雎韵捱@個(gè)名詞在EP或USP中會(huì)見(jiàn)到，中國(guó)藥典則會(huì)描述為：“小于對(duì)照溶液XX倍的色譜峰忽略不計(jì)?！?/span>

USP在2022年01月份發(fā)了一個(gè)關(guān)于“USP通則<621>色譜法-重要標(biāo)準(zhǔn)協(xié)調(diào)”的通告，其中有一條” 術(shù)語(yǔ)"可忽略限度(Disregard limit)"被"報(bào)告閾值(Reporting thresholds)"取代“的內(nèi)容，計(jì)劃于 2022年12月1日起正式生效。此內(nèi)容老王甚是贊同，因?yàn)閷?shí)際工作中有的叫做”忽略限“，有的叫做”報(bào)告限“，搞得分析人員一頭霧水，到底各自有什么作用？互相有什么關(guān)系？又有什么不同？怎么描述怎么叫才合適呢？

其實(shí)，不論是叫做“忽略限“還是”報(bào)告限“，他們的目的是一樣的，叫做“忽略限”，那么就是低于這個(gè)限度的雜質(zhì)可以不報(bào)告，等于和高于這個(gè)限度的雜質(zhì)需要報(bào)告；叫做“報(bào)告限”吧，等于或高于此限度的雜質(zhì)就需要報(bào)告，低于此限度的雜質(zhì)可不報(bào)告。

所以日常工作中，建議參考USP通則<621>色譜法中描述為報(bào)告閾值(Reporting thresholds)較為合適，就避免了人員糾結(jié)到底是忽略限呢還是報(bào)告限呢……

五、如何建立每個(gè)品種的“報(bào)告閾值“呢？

USP還在2021年發(fā)了一個(gè)關(guān)于“報(bào)告限”去留的內(nèi)容，其中說(shuō)了FDA在多個(gè)藥品各論修訂意見(jiàn)中建議刪除各論中的“報(bào)告限“，美國(guó)FDA認(rèn)為藥典各論無(wú)法對(duì)所有生產(chǎn)企業(yè)的每一個(gè)雜質(zhì)或降解產(chǎn)物進(jìn)行鑒定和羅列，那么各論中設(shè)定“報(bào)告限”可能會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)品中某些高毒性雜質(zhì)不被鑒定或報(bào)告。另外，美國(guó)FDA認(rèn)為每個(gè)藥物有其各自的特性，“報(bào)告限”應(yīng)當(dāng)因產(chǎn)品而異，企業(yè)應(yīng)當(dāng)在藥物申請(qǐng)時(shí)做出說(shuō)明，美國(guó)FDA也會(huì)參考ICH的報(bào)告限作為指導(dǎo)原則，對(duì)不同產(chǎn)品進(jìn)行不同的考量。它是讓用戶基于藥物特性、最大攝入劑量等因素自主選擇“報(bào)告限”策略。USP則在接到美國(guó)FDA的意見(jiàn)后，開(kāi)展了一系列工作， 后續(xù)可能在修訂時(shí)刪除已生效各論中的“報(bào)告限”，并通過(guò)凡例的形式對(duì)“報(bào)告限”的選擇提供指導(dǎo)規(guī)范。

老王期待著指導(dǎo)規(guī)范的發(fā)布，當(dāng)然我也從質(zhì)量控制與確保藥物的安全性角度考慮，建議大家建立各自產(chǎn)品”報(bào)告閾值“時(shí)，除了考慮ICH中的報(bào)告限，基于藥物的安全性、如服用劑量等，雜質(zhì)概況，還可考慮方法的靈敏度綜合制定。通常建議可用方法驗(yàn)證得出的定量限作為該產(chǎn)品的報(bào)告閾值，即能確保雜質(zhì)結(jié)果準(zhǔn)確定量，又不高于ICH中的報(bào)告限，而不建議直接用ICH中的報(bào)告限直接作為報(bào)告閾值。

六、檢測(cè)限、定量限、報(bào)告閾值如何應(yīng)用？

方法驗(yàn)證完成后，可將檢測(cè)限（LOD）、定量限（LOQ）應(yīng)用于后續(xù)的Sop編寫(xiě)中，對(duì)分析人員合理報(bào)出檢驗(yàn)結(jié)果具有指導(dǎo)意義。通常：

1、定量限的應(yīng)用：

（1）可參考其制定”報(bào)告閾值“

（2）大于定量限的，即能夠準(zhǔn)確報(bào)出結(jié)果的直接報(bào)告數(shù)值即可。小于定量限的，可以報(bào)告小于定量限（＜LOQ）,同時(shí)可將LOQ備注出來(lái)。

結(jié)果報(bào)告示例：RRT約為1.8的雜質(zhì)＜LOQ（0.03%）。

2、檢測(cè)限的應(yīng)用：

（1）很多小伙伴對(duì)于積分參數(shù)的設(shè)置存有很多疑惑，那么，如果你做了檢測(cè)限，則可參考檢測(cè)限設(shè)置最小峰面積等制訂合理的積分參數(shù)，低于檢測(cè)限可不進(jìn)行積分，避免過(guò)多的雜峰或基線波動(dòng)干擾；大于檢測(cè)限的色譜峰則積分、計(jì)算（積分、計(jì)算是為了分析雜質(zhì)變化趨勢(shì)用）。

（2）可用于指導(dǎo)結(jié)果報(bào)告。如果檢測(cè)數(shù)據(jù)較小，小于檢測(cè)限，則可報(bào)告小于檢測(cè)限（＜LOD）同時(shí)可將LOD備注出來(lái)。例如，RRT約為0.8的雜質(zhì)＜LOD（0.01%）；對(duì)于小于檢測(cè)限的情況也可報(bào)告為未檢出，具體按照哪種方式報(bào)告，需要在各自管理文件中作出明確規(guī)定。

3、報(bào)告閾值的應(yīng)用：

前邊說(shuō)了為了分析各雜質(zhì)的變化趨勢(shì)，對(duì)于大于檢測(cè)限的雜質(zhì)要積分、計(jì)算，那么是否需要報(bào)告呢？則需要視情況而定。若雜質(zhì)含量超過(guò)可以報(bào)告的限度（如定量限、報(bào)告閾值）則可報(bào)告出單雜及可計(jì)入總雜質(zhì)。

結(jié)語(yǔ)：以上為個(gè)人理解與經(jīng)驗(yàn)，如有不妥，敬請(qǐng)指正。

參考資料：

ICH  Q2   分析方法驗(yàn)證

ICH  Q3A  新原料藥中的雜質(zhì)

ICH  Q3B  新制劑中的雜質(zhì)

USP關(guān)于“報(bào)告限”的去留（2021.12.07）

USP通則<621>色譜法